为了解基因结构，通常选取一特定长度的线性DNA分子，先用一种限制酶切割，通过电泳技术将单酶水解片段分离，计算相对大小；然后再用另一种酶对单酶水解片段进行降解，分析片段大小。下表是某小组进行的相关实验。

为了解基因结构，通常选取一特定长度的线性DNA分子，先用一种限制酶切割，通过电泳技术将单酶水解片段分离，计算相对大小；然后再用另一种酶对单酶水解片段进行降解，分析片段大小。下表是某小组进行的相关实验。

已知第一线性DNA序列共有5000bp（bp为碱基对）	第一步水解	产物（单位bp）	第二步水解	产物（单位bp）
	A酶切割	3500	将第一步水解产物分离后，分别用B酶切割	1500 2000
		1000		1000
		500		500
	B酶切割	2000	将第一步水解产物分离后，分别用A酶切割	500 1500
		3000		2000 1000
	经A酶和B酶同时切割	2000 1500 1000 500

（1）该实验中体现出限制酶的作用特点是________________。

（2）由实验可知，在这段已知序列上，A酶与B酶的识别序列分别为______个和____个。

（3）根据表中数据，请在下图中用箭头标出相应限制酶的酶切位点。

（4）已知BamH I与BglⅡ的识别序列及切割位点如下图所示，用这两种酶和DNA连接酶对一段含有数个BamHI和BglⅡ识别序列的DNA分子进行反复的切割、连接操作，若干次循环后和_______序列明显增多，该过程中DNA连接酶催化_________键的形成。

【答案】

（1）一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，且在特定的位点切割

（2）2 1

（3）

（4） 磷酸二酯键

【解析】

（1）该实验中体现出限制酶的作用特点是酶的专一性．

（2）A酶切割后形成3段，所以有2个识别位点，B酶切割后形成2段，所以有1个切割位点．

（3）由于酶B只有一个限制酶切位点，即在2000和3000之间，可以先标注出；又由于酶A又可以将2000的这段切成500和1500的，结合酶A单独切割又可以标注其切割位点，同理标出另一个切割位点，答案如下图：

（4）巳知BamHI与BglII的识别序列及切割位点如图2所示。用这两种酶和DNA连接酶对一段含有数个BamHⅠ和BglⅡ识别序列的DNA分子进行反复的切割、连接操作，若干循环后和序列明显增多。DNA连接酶催化形成的是磷酸二酯键。