经研究表明，在多种肿瘤细胞中的TOP2A蛋白大量表达，因此成为抗肿瘤的研究靶点，某科研单位制作了TOP2A蛋白的单克隆抗体。请回答：

经研究表明，在多种肿瘤细胞中的TOP2A蛋白大量表达，因此成为抗肿瘤的研究靶点，某科研单位制作了TOP2A蛋白的单克隆抗体。请回答：

(1)利用基因工程制备TOP2A蛋白：将TOP2A蛋白基因和质粒用___________处理并连接成重组质粒，然后导入经_________处理的大肠杆菌，并将大肠杆菌接种到含氨苄青霉素的LB液体培养基中培养，经离心得到菌体，破碎提纯得到TOP2A蛋白。

(2)TOP2A蛋白单克隆抗体的制备:将TOP2A蛋白反复多次注射到小鼠体内，使其发生_________，取经过免疫的小鼠B淋巴细胞和骨髓瘤细胞在物质_________介导下发生细胞融合，形成杂交瘤细胞。并将各杂交瘤细胞单独分装培养，经筛选、___________后，获得能产生单一抗体的__________

A.连续细胞系B.有限细胞系C.连续细胞株D.有限细胞株

【答案】

DNA连接酶和限制性核酸内切酶 CaCl2 免疫反应 聚乙二醇 克隆培养 C

【解析】

本题考查基因工程和制备单克隆抗体的相关知识，解题思路是根据题意对所学的课本上的相关知识进行梳理和再现，然后进行综合分析解答。

（1）在基因工程中常用DNA连接酶和限制性核酸内切酶处理，连接目的基因和质粒；为了提高重组质粒导入大肠杆菌的概率，常用CaCl2处理，以增大大肠杆菌细胞壁的通透性。

（2）在制备单克隆抗体过程中，首先用TOP2A蛋白（相当于抗原）反复多次注射到小鼠体内，使其发生免疫反应；然后取经过免疫的小鼠B淋巴细胞和骨髓瘤细胞在聚乙二醇介导下发生细胞融合，形成杂交瘤细胞。并将各杂交瘤细胞单独分装培养，经筛选、克隆培养后，获得能产生单一抗体的杂交瘤细胞，这样的杂交瘤细胞在适宜条件下能无限繁殖，属于连续细胞株，故C项正确，A、B、D项错误。